武汉思特进科技发展有限公司主营：动植物,细菌,细胞生物实验
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原位杂交技术可应用于什么方面

1.细胞特异性mRNA转录的定位 可用于基因图谱、基因表达和基因组进化的研究。

2.感6染组织中病毒DNA/RNA的检测和定位，如EB病毒mRNA、人类乳3头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测。

3.癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测。

４.基因在染色体上的定位。

5.检测染色体的变化，如染色体数量异常和染色体易位等。

6.分裂间期细胞遗传学的研究，如遗传病的产前诊断和某些遗传

原位杂交(In Situ Hybridization)也叫原位杂交组化(in situ hybridization histochemistry, ISHH)，是一种固相分子杂交的方法，bai它是用标记的DNA或RNA为探针，在原位检测组织或细胞内特定核酸序列的方法。探针的种类按所带标记物可分为同位素标记探针和非同位素标记探针两大类。常用的同位素标记物有3H、35S、125I和32P，非同位素标记物中目前很常用的有生物素、地高6辛和荧光素三种。探针的种类按核酸性质不同又可分为DNA探针、cDNA探针、RNA探针和合成寡核苷酸探针。

原位杂交术可在原位检测细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达，有很高的敏感性和特异性，已成为细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。

杂交技术zui重要的因素之一是选择zui适的杂交反应温度。若反应温度低于Tm 10～15℃，碱基顺序高度同源的互补链可形成稳定的双链，错配对减少。若反应温度再低（Tm-30℃），虽然互补链之间也可形成稳定的双链，但互补碱基配对减少，错配对增多、氢键结合的更弱。如两个同源性在50%左右或更低些的DNA，调整杂交温度可使它们之间的杂交率变化10倍，因此在实验前必须首先确定杂交温度。通常有三种温度可供试验，即zui适复性温度、苛刻复性温度及非苛刻复性温度。温度的选择及温度对杂交的影响见表18-3。

zui适复性温度（Optimunm renaturation temperature, TOR）：Tor =Tm –25℃

苛刻复性温度：Ts = Tm – (10或15℃)

非苛刻复性温度：Tns =Tm – (30或35℃)