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组织冰冻切片OCT包埋剂
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组织冰冻切片OCT包埋剂
货号:ZK-PL3894
品牌:子科生物ZIKER
描述:
子科生物-冷室、组织块、包埋剂、切片刀之间的温度平衡于优化的切片温度(optimum cutting temperature, OCT)附近,是获得高质量冰冻切片的保证。不同的组织因构成各异而具有不同的OCT温度。当冰冻组织在接触刀刃的瞬间,局部温度短暂升高发生局部融化;随后切开的组织薄片暴露于冷室被再次骤冷冰冻。这种融化-冰冻温度变化是切片皱褶或断裂的内在原因,在此基础上切片的软硬度和厚薄度进一步影响皱褶产生(1)。在切片过程中,冰冻包埋剂也须历经与组织类似的温度变化,这就要求包埋剂必须具有与组织块相近的冰冻速度和软硬韧度。
普利莱冰冻组织切片OCT包埋剂是由高分子聚合物组成的无色透明粘稠液体,骤冷时固化,其冰冻速度和软硬韧度与组织细胞相近,因而能保证优化的OCT温度,并具有支持填充、减少皱褶和断裂等作用。可任意添加于切片机的样品架以支持和固定样品。
特点:
1、 支持超薄和超厚(2~100 µm)冰冻切片并减少皱褶和断裂
2、 不影响后续免疫组化、原位杂交、病理染色等操作
3、 可经由水或PBS冲洗完全去除,是理想的组织冰冻包埋剂。
适用:
组织和培养细胞的冰冻包埋固定。用于临床快速病理染色诊断、免疫组化、原位杂交。
组成:
120 ml,4ºC 1年。无色透明粘稠液体,温度降低时逐渐变粘稠并固化。
使用前标本准备:
冰冻切片标本可采用 (1) 新鲜组织,特点是快速,但未用完的包埋组织块不能保存;(2) 使用经典方法10%甲醛或4%多聚甲醛室温2~10分钟固定过的组织,优点是既不影响后续步骤,包埋组织块又可长期冰冻保存,随时再用,缺点是步骤稍繁。(3) 培养细胞,800g离心10分钟收集培养细胞,用吸头或针头拨出细胞沉淀块,放入OCT包埋剂内。
应避免采用降低组织冰点的甲醇乙醇固定。本产品说明书不提供关于组织取材、渗透、固定、冰冻切片等技术信息。用户应阅读冰冻切片机操作手册,参考各种常规技术方法。
使用方法:
1. OCT包埋:用水或PBS冲洗固定的组织块,用吸水纸吸去液体。在盛标本的包埋模子内,挤出适量的包埋剂,放入组织和细胞沉淀块,加包埋剂完全埋没组织块。可用2层铝箔纸折叠成简易的模子。如有气泡可用针头或吸头吸出。
2. 冰冻:将盛有组织细胞和包埋剂的模子,正置于切片机冷室内冰冻10分钟。此时,包埋剂为乳白色固体。包埋剂和组织冷冻时体积略有膨胀,因此模子应正置,由底部向顶部进行冰冻。也可将OCT包埋的组织置于干冰或液氮,或放入-40~-70 ºC冰箱冰冻固化保存,用前取出置于切片机冷室内平衡温度(否则损坏刀)。
3.切片:可在切片机的组织卡盘(chuck)上加少许包埋剂并在其固化前嵌入组织块,然后再于组织周围加入少许包埋剂使其稳定。进行常规切片,厚度范围2~100 µm。
4. 收片后,用适量水或PBS冲洗切片3次,每次2−3分钟,洗除包埋剂。而后可进行常规组化染色、病理染色、原位杂交。未用完的组织块可冷冻储存。
附表为新鲜组织的冰冻切片OCT温度。固定过的组织的OCT温度升高相应5~10°C
组织 | °C | 组织 | °C | 组织 | °C |
子宫刮出物 | -7 | 肾 | −15 | 子宫颈 | −20 |
脑 | −10 | 肺 | −16 | 卵巢 | −20 |
肝 | −10 | 肌肉 | −16 | 前列腺 | −20 |
脾 | −10 | 结蹄组织 | −16 | 消化道 | −20 |
睾丸 | −10 | 皮肤 | −16 | 骨髓 | −20 |
甲状腺 | −10 | 心 | −18 | 连脂肪皮肤 | −25 |
唇 | −13 | 胰腺 | −20 | 乳腺 | −30 |
淋巴结 | −15 | 子宫 | −20 | 网膜脂肪 | −35 |
通常折中采用−20°C。肝脑脾等组织的OCT切片温度应在−10 ºC,否则易碎。脂肪或含脂肪多的组织的OCT切片温度更低,否则易皱褶。
常见问题及解决方案:
易碎 | 冷冻过快,或标本太大 |
组织、包埋块从支架脱落 | 包埋剂不足,组织在包埋剂中的位置过偏 |
组织向前推进但不能顺利切片 | 刀和组织未固定紧,刀的角度不合适,组织未完全冷冻 |
切片卷曲 | Anti-roll plate不干净,切片太薄,刀钝 |
切片撕裂 | 组织过分冷冻,刀口受损、不洁 |
切片融化 | 冷室和刀的温度不正确 |
刀上有雾 | 切片机开盖时间过长 |
切片粘在 anti-roll plate | 温度不正确,anti-roll plate不洁 |
切片歪向一侧 | 刀口钝、受损,anti-roll plate受损 |
切片从玻片脱落 | 没用玻片粘附剂,切的是固定组织、脂肪含量高的标本,操作粗糙 |
切片水平裂痕 | 切片时标本太冷 |